与常规方法比较
常规方法 | Wako的新方法 | |
总RNA提取 | 需要 | 不需要 |
小RNA (≦200nt)的纯化 | ||
变性PAGE电泳 | ||
从变性PAGE凝胶中进行凝胶抽提 | ||
从变性PAGE胶中进行凝胶纯化 | ||
rRNA片段污染率 | 高 | 低 |
tRNA片段污染率 | 高 | 低 |
操作时间 | ≦12小时 |
≦4小时 |
使用例1:
图1:使用microRNA Isolation Kit,Human Ago2纯化microRNA片段
从培养的人类细胞系(HeLa,HepG2,HEK293)中纯化的microRNA片段用Urea-PAGE和银染方法(Wako Cat. No. 311-03961;CLEAR STAIN Ag)检测。每个细胞系的数目大约是5×106。上样量是用该试剂盒纯化后获得的5ul microRNA溶液(制备的溶液一般是10ul)。
siRNA药理研究
将小分子干扰RNA(siRNA)直接注入细胞中,这些siRNA结合蛋白元件,也可形成RISC,此试剂盒也可纯化与Ago2结合的siRNA,便于后续的siRNA研究分析。因此此试剂盒不仅能分离miRNA,亦可作用于siRNA,大大拓宽了试剂盒的使用范围。
后续研究:
1)RNAi的抑制效果
2)siRNA的药代过程
3)体内siRNA的稳定性
4)毒性/副作用
5)对于非特异性mRNAs的脱靶效应
货号 品名 规格
291-70201microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1 10tests
292-66701 microRNA Isolation Kit, Human Ago2 10tests
292-67301 microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 10tests
297-70301 microRNA Isolation Kit, Human Ago3 10tests
290-66501 microRNA Cloning Kit 8tests
298-65103 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution 200units
292-65101 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution 500units
298-67901 PCR Purification Kit 30tests
298-68001 Target mRNA Cloning Kit 10tests